• 单域抗体(纳米抗体)定制服务

    什么是纳米抗体?

    纳米抗体最早是由比利时科学家 Hamers 等1993 年在自然杂志中首次报道,在羊驼外周血液中存在一种天然缺失轻链的抗体,该抗体只包含一个重链可变区(VHH)和两个常规的CH2与CH3区,该抗体是已知的可结合目标抗原的最小单位。VHH晶体为2.5nm,长4nm,分子量只有15KD,因此也被称作纳米抗体(Nanobody,Nb)。它是最小的功能性抗原结合片段。和普通抗体相比,纳米抗体分子量小,结构简单,易于进行基因?#33041;歟?#20307;积小,抗原特异性好,组织穿透力强,稳定性高,在疾病的诊断及治?#21697;?#38754;有广阔的应用前景。

    纳米抗体与普通抗体的机构和功能比较

    目前普遍认为单域抗体和传统抗体相比具有如下分子及结构特征。首先,重链的同型二聚体缺少轻链及第一个恒定区,重链可变区抗体Fc段结合通过铰链区链接。在序列上,普通抗体和纳米抗体序列大部分相同,但存在五个保守位点?#34987;?#37240;差异。Leu12Ser(即12位在VH中常为Leu, 而在VHH中此位常为Ser), Val42Phe/Tyr, Gly49Glu, Leu50Arg/Cys, 和Trp52Gly(不是非常保守)。VH中42,49,50,52这四个位点主要参与与VL 作用,多为疏水的?#34987;?#37240;,但在VHH中变成了亲水的?#34987;?#37240;,这?#20013;?#21015;的改变增加了纳米抗体的水溶性,减少了抗体的聚合性,也直接导致了VHH不能够结合轻链。

    此外,VHH有更长的CDR3,由16~24个?#34987;?#37240;组成,甚至有些单域抗体的CDR3超过25个?#34987;?#37240;,相对于传统单抗,其CDR3仅有7~12个?#34987;?#37240;。这种长CDR3结构形成的?#22815;?#26377;利于单链抗体与抗原分子的隐蔽的抗原表位,这也是提高单链抗体对抗原结合能力的主要原因。同时导致其结构非常稳定,能够耐受高温及?#37327;?#30340;极端环境。其次,纳米抗体没有传统的Fc段,从而避免了Fc段引起的补体反应。纳米抗体易于进行基因操作,从而形成单价、双价、双特异及多价抗体,同时也能形成融合蛋白进行靶向治疗。

    纳米抗体的优势与应用

    纳米抗体诸多方面均优于传统抗体 。基于VHH单域抗体的特殊结构,兼具了传统抗体与小分子药物的优势,几乎完美克服了传统抗体的开发周期长,稳定性?#31995;停?#20445;存条件?#37327;?#31561;缺陷,逐渐成为新一代治疗性生物医药与临床诊断试剂中的新兴力量。相比于常规抗体,纳米抗体的优势有:

    1.分子量小,可穿透血脑屏障;

    2.原核或真核系统中高表达;

    3.特异性强,亲和力高;

    4.对人的免疫原性弱;

    5.稳定性好;

    6.可溶性高,吸收好;

    7.人源化简单;

    8.偶联其他分子容易。

    纳米抗体获得

    为更快速的获得纳米抗体,利?#31859;?#20027;研发的ABexpressTM抗体发?#21046;?#21488;筛选单克隆抗体,这是一种基于流式分选,并体外克隆和表达抗原特异性B细胞抗体基因的技术,即通过不同的流式抗体和靶标抗原组合,分选出对靶标抗原具有亲合力的单个B细胞,通过PCR技术,克隆抗体编码基因并构建编表达载体,通过转染工具细胞株后,可快速验证纳米抗体的功能。

    技术流程:

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    为什么选择ABexpresTM

    这种方法保留了轻重链可变区的天然配对,具有基因多样性好、效率高、适用于?#25105;?#21160;物抗体筛选的特点。可避免使用噬菌体库筛单克隆抗体过程中的假阳性,或非特异性结?#31995;任?#39064;,可大大加速纳米抗体筛选的速度,适用于大规模的单克隆抗体药物筛选。

    ABexpressTM

    杂交瘤技术

    噬菌体技术

    • 覆盖免疫动物产生的所有靶标特异性抗体分泌细胞

    • 最短六周,一?#20132;竦米?#30830;的抗体基因编码序列

    • 平台可扩展至?#25105;?#21160;物的单克隆抗体或纳米抗体 高通量,一次可以获取到100+不同的候选抗体

     

    • 杂交瘤融合效率低,很多B细胞不能形成稳定融合株

    • 大量细胞培养,制备成本极高  

    • 因为骨髓瘤细胞的限制,当前只能制备鼠单克隆抗体

    • 工作人员培训时间长,工作量大,通?#24247;?/p>

    • 单抗制备流程长(8-10个月)

    • 杂交瘤细胞不稳定,容易导致抗体基因丢失  

     

    • 噬菌体构建过程中,无法保证噬菌体库覆盖所有序列

    • 抗体展示过程中可能出现错误结构,抗体无法与靶抗原结合

    • 噬菌体与靶标的非特异性结合无法避免

    • 淘选工作量庞大,获得候选抗体数?#21487;?/p>

    • 费用高,周期长


    案例展示:

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    图示?#24471;鰨?#20351;用ABexpressTM平台获得的单域抗体呈多样性


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    图示?#24471;鰨?#22522;于ABexpressTM筛选的纳米抗体可有效的与靶细胞结合

    • PBMC处理

    • 抗体展示库制备

    • 抗体筛选和亲和力测定

    • 抗体功能鉴定

    • 20-26周交付

    • ?#24247;?#22522;因信息

    • 重组蛋白

    • 重组抗体

    • 实验报告

    0086-512-62570431

    [email protected]

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