• CAR-T發現之旅

            細胞毒性淋巴細胞(Cytotoxic T Lymphocytes,CTL)在機體中扮演著重要的抗腫瘤角色,通過T細胞受體TCR與抗原肽MHC分子復合物的特異性識別結合形成對腫瘤細胞的監視。但腫瘤細胞的HLA-I分子表達通常是下調的,這就成為腫瘤細胞逃脫機體免疫監視的重要機制之一,正是由于HLA-I分子的限制,機體內自然產生的TCR很難有效活化并發揮抗腫瘤作用。這使得CTL及相關的細胞免疫治療的抗腫瘤作用受到了很大的限制。

            嵌合抗原受體(CAR)的結構類似于TCR,由胞外特異性腫瘤抗原識別區、鉸鏈、跨膜區以及胞內信號傳導域四部分組成。胞外異性腫瘤抗原識別區也稱單鏈可變區,融合了針對腫瘤抗原特異性抗體的重鏈和輕鏈可變區,能夠以非HLA分子依賴的模式直接識別腫瘤相關或者特異性抗原,并通過胞內信號域傳導信號、活化效應T細胞。胞內信號域來自免疫球蛋白受體的CD3ζ鏈及共激活信號CD28或CD137等,而跨膜區可來源于同一分子或為單次跨膜受體蛋白。通過慢病毒、逆轉錄病毒、mRNA等載體,讓T細胞過表達CAR分子,可以獲得靶向某一特定抗原的CAR-T細胞,愛康得生物在抗體藥物研發和CAR-T研發積累了豐富的經驗,可以為全球客戶研發具有專利的嵌合抗原受體T細胞產品,所提供的服務可滿足CFDA對數據的復查,我們可以提供的服務有:

            一、CAR結構的設計

            自公司成立以來,公司已經為全球客戶提供的上百例的CAR-T服務,除常規的二代、三代CAR分子外,我們在雙CAR、增強型CAR、及攜帶安全開關的CAR分子設計上積累了豐富的經驗。此外我們可以為CAR表達載體上安裝不同的Marker,用于CAR分子表達情況的檢測。

            二、腫瘤抗原的選擇
            CAR-T細胞靶點的選擇具有一定的規律性:

            第一,該抗原應具有較好的特異性。最理想的抗原應為腫瘤特異性抗原(Tumor specific antigen, TSA),即僅在腫瘤細胞上表達的抗原。但大多數情況下,這類抗原極難發現,因此腫瘤相關性抗原(TAA)是目前大多數CAR-T的靶點。腫瘤相關性抗原往往在正常組織中也有表達,但表達量較腫瘤組織中更少,因此在靶點的選擇時應剔除那些會在重要組織中表達的抗原,以避免“On tumor off target”發生的可能。

            第二,靶蛋白應選擇膜蛋白。部分TSA/TAA為分泌型抗原,此類抗原在血清中濃度較高,當CAR-T細胞回輸體內后,游離的抗原與CAR-T細胞競爭性結合,從而抑制了CAR-T細胞對靶細胞的結合,因此也不合適作為CAR-T的靶點。因此只有膜蛋白是CAR-T靶點的最佳選擇。

             三、scFv的獲取


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            scFv是CAR-T細胞特異性識別腫瘤細胞的關鍵,其對抗原的親和力和特異性影響著CAR-T的有效性和安全性。通過數據庫固然可以獲得某些抗體的序列,但專利的缺失,限制了未來的產業化。愛康得生物在治療性抗體篩選領域積累了豐富的經驗:在抗原制備環節,我們可以提供多種免疫方案,除原核表達系統、酵母表達系統、哺乳動物表達系統獲得的重組蛋白以外,我們也可以利用重組細胞株或腺病毒免疫宿主動物,并確保抗體可識別靶蛋白胞外段的天然結構;在抗體篩選環節,除傳統鼠單克隆抗體篩選服務之外,我們可以進一步提供鼠抗人源化服務,可進一步獲得對抗原具有高親和力和特異性的抗體,此外我們也可以提供納米抗體和全人源抗體的篩選服務。在此基礎上,我們的團隊可以為您提供具有自主知識產權的scFv,用于CAR-T的構建。

            四、過表達CAR的慢病毒包裝


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            慢病毒是目前最為成熟的基因轉染工具之一,利用過表達CAR的慢病毒為載體轉染T細胞可獲得CAR-T細胞。除常規的科研級CAR慢病毒以外,為滿足基因治療市場的需求,我們研發了整套無血清臨床級慢病毒生產體系,建立了符合GMP要求的整套無血清生產的S.O.P及種子細胞庫和工作細胞庫,公司的慢病毒大規模制備及純化工藝生產規模可以根據需求從200mL到50L任意設定。我們已經為全球多家臨床單位提供臨床級慢病毒,滿足臨床使用需求。

            五、CAR-T體內外藥效學實驗

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            當特異的CAR-T淋巴細胞在體外與靶細胞接觸時,可表現出破壞和溶解靶細胞的特性,稱為淋巴細胞毒作用(cytotoxicity),即為我們希望的細胞藥效。愛康得生物已經為全球近百家機構開展了CAR-T細胞的體內外藥效學實驗。我們可以為您構建所需的過表達細胞株用于細胞/動物模型的構建,通過效靶比實驗驗證CAR-T細胞的激活程度及對靶細胞的殺傷能力。我們在NGS小鼠成瘤領域也積累了大量的項目經驗,構建過數十種小鼠成瘤模型,利用小動物成像系統,可動態檢測CAR-T在小鼠體內對腫瘤的殺傷情況。

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